發(fā)布時(shí)間:2023-09-22 18:08:27
序言:作為思想的載體和知識(shí)的探索者,寫(xiě)作是一種獨(dú)特的藝術(shù),我們?yōu)槟鷾?zhǔn)備了不同風(fēng)格的5篇醫(yī)學(xué)影像的危害,期待它們能激發(fā)您的靈感。
近年來(lái),伴隨著國(guó)家大力發(fā)展濱海新區(qū)的一系列政策扶持,國(guó)際國(guó)內(nèi)對(duì)新區(qū)的發(fā)展投入了熱切關(guān)注。在蓬勃向上的大環(huán)境驅(qū)動(dòng)下,新區(qū)現(xiàn)代服務(wù)業(yè)發(fā)展速度明顯加快、產(chǎn)業(yè)規(guī)模和質(zhì)量日漸提升。現(xiàn)代化服務(wù)的快速發(fā)展帶來(lái)人才的缺口,也為天津高校畢業(yè)生們帶來(lái)職業(yè)生涯發(fā)展的寶貴機(jī)遇。天津市眾多高職院校近年來(lái)在“以服務(wù)為宗旨,以就業(yè)為導(dǎo)向”的指導(dǎo)原則下,積極致力于培養(yǎng)職業(yè)型、復(fù)合型的高端現(xiàn)代服務(wù)業(yè)從業(yè)人員,為地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展建設(shè)提供了有力的人才支持。近年來(lái),依托港口優(yōu)勢(shì)快速發(fā)展的物流業(yè)、金融業(yè)、外貿(mào)業(yè)、民航服務(wù)、會(huì)展業(yè)及服務(wù)外包業(yè)對(duì)具備一定專(zhuān)業(yè)操作實(shí)踐能力且外語(yǔ)溝通能力過(guò)硬的高職畢業(yè)生倍加青睞。這些高職生具備一線操作能力,踏實(shí)肯干,交際能力強(qiáng)且可塑性強(qiáng),在服務(wù)型行業(yè)中,特別是具有進(jìn)出口行為的生產(chǎn)企業(yè),外貿(mào)、物流等行業(yè)中需求很大。由此,英語(yǔ)教學(xué)近年來(lái)在全國(guó)各地特別是沿海地區(qū)的高職院校得到了特別的重視,英語(yǔ)作為國(guó)際化辦公環(huán)境中職場(chǎng)人士的必要工具,成為了企業(yè)對(duì)人才綜合素質(zhì)考核的一項(xiàng)重要指標(biāo),也是人才在未來(lái)職業(yè)生涯發(fā)展中必備的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。高職公共英語(yǔ)教學(xué)要積極抓住發(fā)展的機(jī)遇,順應(yīng)人才需求新形勢(shì),立足于區(qū)域發(fā)展定位,從教學(xué)模式、內(nèi)容、教學(xué)資源的優(yōu)化等多方面做出積極調(diào)整,打造學(xué)生在職業(yè)崗位中熟練使用英語(yǔ)進(jìn)行行業(yè)關(guān)聯(lián)的日常業(yè)務(wù)交流素質(zhì)和技能,為學(xué)生的職業(yè)發(fā)展服務(wù),從而更好地服務(wù)于新區(qū)的發(fā)展建設(shè)。
二、高職公共英語(yǔ)教學(xué)應(yīng)具地區(qū)特色并與行業(yè)發(fā)展緊密對(duì)接
在新區(qū)一體化經(jīng)濟(jì)發(fā)展的形勢(shì)下,英語(yǔ)作為國(guó)際化的通用語(yǔ)言,在本地區(qū)社會(huì)生活和經(jīng)濟(jì)貿(mào)易中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。英語(yǔ)教學(xué)只有更貼近學(xué)生的實(shí)際需要,使學(xué)習(xí)者體驗(yàn)到其在職業(yè)環(huán)境中的價(jià)值,才能獲得長(zhǎng)足的發(fā)展。因此,高職公共英語(yǔ)課程教學(xué)的開(kāi)展要結(jié)合實(shí)際場(chǎng)景和崗位需求,而不能一味的將其視其為一門(mén)語(yǔ)言學(xué)習(xí)的過(guò)程。
(一)基礎(chǔ)英語(yǔ)與行業(yè)英語(yǔ)并行的教學(xué)定位
高職英語(yǔ)課程體系的建立要以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向,應(yīng)用為主旨,在分析崗位能力要求的基礎(chǔ)上,準(zhǔn)確合理地制定教學(xué)目標(biāo),構(gòu)建以培養(yǎng)職業(yè)能力和提高學(xué)生綜合素質(zhì)為目標(biāo)的英語(yǔ)課程。各地高職院校英語(yǔ)教學(xué)內(nèi)容不應(yīng)該是統(tǒng)一的,應(yīng)該深度結(jié)合地區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展形勢(shì)及行業(yè)特點(diǎn),最大限度地與學(xué)生的未來(lái)就業(yè)掛鉤,使教學(xué)內(nèi)容和課堂模式貼近學(xué)生的專(zhuān)業(yè),著力打造學(xué)生的行業(yè)英語(yǔ)會(huì)話(huà)能力,進(jìn)而其綜合職業(yè)素養(yǎng)。落實(shí)到教學(xué)實(shí)踐上,公共英語(yǔ)課程教學(xué)應(yīng)該是基礎(chǔ)英語(yǔ)學(xué)習(xí)逐步過(guò)渡到行業(yè)英語(yǔ)運(yùn)用的一個(gè)過(guò)程。
基礎(chǔ)英語(yǔ)教學(xué)可以根據(jù)不同專(zhuān)業(yè)的學(xué)生基礎(chǔ)及需求設(shè)定學(xué)時(shí)比例,淡化傳統(tǒng)教學(xué)內(nèi)容中語(yǔ)法學(xué)習(xí)及詞匯拓展等應(yīng)試性較強(qiáng)的系統(tǒng)化英語(yǔ)學(xué)習(xí),強(qiáng)化聽(tīng)與說(shuō)的能力訓(xùn)練,以發(fā)音技巧、會(huì)話(huà)習(xí)慣、常用生活英語(yǔ)詞匯語(yǔ)句入手,為學(xué)生創(chuàng)設(shè)一個(gè)積極、活躍的英語(yǔ)使用氛圍,進(jìn)而逐步自日常辦公會(huì)話(huà)過(guò)渡到更為專(zhuān)業(yè)的會(huì)話(huà)、讀寫(xiě)能力的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)。各專(zhuān)業(yè)的行業(yè)英語(yǔ)學(xué)習(xí)和訓(xùn)練應(yīng)是個(gè)性化的,為本專(zhuān)業(yè)的實(shí)際需要量身打造教學(xué)內(nèi)容。進(jìn)而,在各專(zhuān)業(yè)有限的《大學(xué)英語(yǔ)》課程學(xué)時(shí)內(nèi),最大程度的使基礎(chǔ)英語(yǔ)教學(xué)中聽(tīng)、說(shuō)、讀、寫(xiě)、譯能力有針對(duì)性的向具體行業(yè)服務(wù)特色靠攏。
(二)教材的開(kāi)發(fā)和選用應(yīng)結(jié)合地區(qū)職業(yè)特點(diǎn)
教材的開(kāi)發(fā)和選用要最大限度的與工作實(shí)際以及地區(qū)社會(huì)經(jīng)濟(jì)或人文背景相聯(lián)系,因此,鼓勵(lì)高職院校的英語(yǔ)教學(xué)結(jié)合地區(qū)特色,從本校學(xué)生的英語(yǔ)基礎(chǔ)及職業(yè)需求的角度出發(fā),打造適用于不同專(zhuān)業(yè)的個(gè)性化校本教材。在教學(xué)中,教師應(yīng)善于為學(xué)生提供貼近生活,貼近專(zhuān)業(yè)的學(xué)習(xí)和訓(xùn)練,創(chuàng)設(shè)現(xiàn)實(shí)的語(yǔ)言會(huì)話(huà)環(huán)境,提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和參與積極性,從行業(yè)實(shí)際出發(fā),引導(dǎo)學(xué)生由淺及深,由基礎(chǔ)至專(zhuān)業(yè)化的訓(xùn)練英語(yǔ)會(huì)話(huà)能力。
在先階段的基礎(chǔ)英語(yǔ)教學(xué)中使用日常英語(yǔ)會(huì)話(huà)教材作為主教材的補(bǔ)充,分模塊分階段的引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行問(wèn)候、寒暄、約會(huì)、愛(ài)好日常交際類(lèi)交流,培養(yǎng)學(xué)生“說(shuō)”的習(xí)慣和技巧。在一定階段的基礎(chǔ)英語(yǔ)學(xué)習(xí)任務(wù)完成以后,各專(zhuān)業(yè)的教學(xué)實(shí)踐將使用個(gè)性化的口語(yǔ)教材開(kāi)展分門(mén)別類(lèi)行業(yè)英語(yǔ)教學(xué),例如:
a)在國(guó)商、物流、金融等涉外專(zhuān)業(yè)的《大學(xué)英語(yǔ)》教學(xué)中,補(bǔ)充使用商務(wù)類(lèi)英語(yǔ)口語(yǔ)教材,教學(xué)重點(diǎn)以外事接待,商務(wù)會(huì)談,進(jìn)出口貿(mào)易,金融服務(wù)等方面的職業(yè)會(huì)話(huà)能力為主;
b) 廣告、設(shè)計(jì)、電腦制作等藝術(shù)專(zhuān)業(yè)補(bǔ)充使用藝術(shù)英語(yǔ)口語(yǔ)教材,會(huì)話(huà)內(nèi)容以廣告、動(dòng)畫(huà)等設(shè)計(jì)類(lèi)術(shù)語(yǔ),以及展會(huì)用語(yǔ),客戶(hù)交流等方面的內(nèi)容為主;
c) 工科專(zhuān)業(yè)補(bǔ)充使用工程英語(yǔ)口語(yǔ)教材,培養(yǎng)學(xué)生基本的施工、操作現(xiàn)場(chǎng)英語(yǔ)交流能力。
此外,高職英語(yǔ)教學(xué)要實(shí)現(xiàn)與專(zhuān)業(yè)教學(xué)對(duì)接,就要做到與各學(xué)科有效的共融。因此,英語(yǔ)教學(xué)團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)緊密結(jié)合行業(yè)教學(xué)的需求,加強(qiáng)自身的行業(yè)英語(yǔ)教學(xué)能力。一方面,鼓勵(lì)英語(yǔ)教師到企業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行頂崗培訓(xùn),提高教師對(duì)專(zhuān)業(yè)操作的了解。另一方面,英語(yǔ)教學(xué)團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)積極的與專(zhuān)業(yè)教學(xué)團(tuán)隊(duì)“打成一片”,共同致力于行業(yè)英語(yǔ)教材的打造和教學(xué)方法的創(chuàng)新,在教學(xué)內(nèi)容和課堂模式的設(shè)計(jì)上廣泛交流,使英語(yǔ)教學(xué)擺脫枯燥乏味的理論講練模式,真正的把職場(chǎng)情景帶到課堂里,使學(xué)生在課堂中獲得的英語(yǔ)知識(shí)和能力,成為日后其職業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力中的優(yōu)勢(shì)。
(三)教學(xué)中強(qiáng)化職場(chǎng)環(huán)境下的會(huì)話(huà)能力
雖然教學(xué)改革倡導(dǎo)多年,但目前高職英語(yǔ)的困境依然存在,教學(xué)模式依然老舊傳統(tǒng),教學(xué)內(nèi)容和形式依然保守,偏于學(xué)術(shù)化和理論化。筆者在調(diào)研中了解到,多數(shù)高職院校依然以英語(yǔ)等級(jí)考試通過(guò)率作為英語(yǔ)教學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。這就導(dǎo)致學(xué)生對(duì)英語(yǔ)學(xué)習(xí)的重視程度依舊停留在“過(guò)級(jí)”、“取證”上,因此,學(xué)習(xí)內(nèi)容多以記單詞,學(xué)語(yǔ)法,背作文模板為主,并未把和日后將和自己日常生活工作需要最貼近的英語(yǔ)交際能力放在一個(gè)重要位置。這樣的只會(huì)寫(xiě),不會(huì)說(shuō)的英語(yǔ)水平將成為阻礙學(xué)生在未來(lái)職業(yè)發(fā)展中的自身綜合能力的一個(gè)短板。高職英語(yǔ)教學(xué)要不斷的創(chuàng)新教學(xué)內(nèi)容,使之更加貼近學(xué)生的就業(yè)實(shí)際,要突破系統(tǒng)性、完整性,充分體現(xiàn) “實(shí)用為主,夠用為度”的原則,使其真正滿(mǎn)足職業(yè)教育的要求。因此,口語(yǔ)會(huì)話(huà)能力應(yīng)該作為教學(xué)中的突破重點(diǎn),一切努力將為使學(xué)生自信的開(kāi)口說(shuō)英語(yǔ),并且在本專(zhuān)業(yè)的工作實(shí)踐中流利的使用英語(yǔ)而服務(wù)。因此,教師要積極打破沉悶的傳統(tǒng)英語(yǔ)課堂模式,多創(chuàng)設(shè)與學(xué)生專(zhuān)業(yè)相關(guān)的情景進(jìn)行英語(yǔ)應(yīng)用能力訓(xùn)練,給學(xué)生更多聽(tīng)、說(shuō)、練的場(chǎng)景,使其在輕松活躍的課堂氛圍下,達(dá)到使用英語(yǔ)和業(yè)務(wù)訓(xùn)練的良好效果,為其日后順利的走進(jìn)職場(chǎng),做好提前預(yù)熱。
【摘要】
目的觀察穴位埋線和胰島素聯(lián)合應(yīng)用對(duì)擬阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響,并探討其可能的治療機(jī)制。方法大鼠海馬CA1區(qū)微量注射岡田酸(Okadaic acid,OA)建立擬AD模型大鼠。腎腧、大椎穴位埋線、胰島素側(cè)腦室注射。用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其學(xué)習(xí)記憶能力,電鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化,免疫組化方法觀察膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)的表達(dá) 。結(jié)果與模型組比較,穴位埋線組、聯(lián)合組的學(xué)習(xí)記憶能力明顯改善(P
【關(guān)鍵詞】 阿爾茨海默病 穴位埋線 胰島素 學(xué)習(xí)記憶 凋亡 膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶
Abstract:ObjectiveTo study the effects and its possible mechanism of Catgut implantation at acupoint and Insulin on the learning and memory abilities of Alzheimer’s Disease (AD) rats.MethodsOkadaic acid(OA) was injected into hippocampal CA1 region of rats with microdosis repeatedly to establish Alzheimer’s disease-like model ,and then insulin was injected into the lateral ventricle of cerebrum and catgut was implanted in Shenshu and Dazhui acupucture point .The learning and memory capacity of rats were assessed through Morris Water Maze behavioral test. Ultrastructure was observed by electron miscroscope and the expressions of ChAT apoptosis of neurons were examined by immunohistochemistry in hippocampus CA1 region of the rats.ResultsCompared with model group, learning and memory capacity was improved obviously, and the expression of ChAT in hippocampal CA1 region was increased significantly in rats of catgut implantation at acupoint group and combination group, moreover, the effects were better in combination group .ConclusionCombination of Catgut implantation at acupoint and Insulin is more effective than only Catgut implantation at acupoint in Alzheimer’s disease rats,the mechanism might be related with improving ultrastructure in hippocampal CA1 region and function of central cholinergic system.
Key words:Alzheimer’s disease; Catgut implantation at acupoint; Insulin; Learning and memory; Apoptosis; Choline acetyl-transferase
阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD) 主要表現(xiàn)為記憶障礙、認(rèn)知功能減退等膽堿能神經(jīng)受損所致的神經(jīng)功能紊亂。其病理特點(diǎn)為老年斑(senile plaques,SP)、神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFT)及神經(jīng)元丟失。膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)活性下降被認(rèn)為是AD的一個(gè)標(biāo)志性生化特征[1]。目前AD的防治尚無(wú)重要突破。針灸通過(guò)激發(fā)機(jī)體潛能、調(diào)節(jié)全身臟腑功能干預(yù)AD的病理過(guò)程 [2,3],而胰島素在促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)發(fā)育、調(diào)節(jié)神經(jīng)元生長(zhǎng)及遞質(zhì)的釋放等方面起著重要作用[4]。本課題組前期報(bào)道胰島素具有改善擬AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的功效。本研究采用穴位埋線聯(lián)合胰島素處理擬AD大鼠,通過(guò)觀察海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu),ChAT陽(yáng)性表達(dá)以探討埋線聯(lián)合胰島素對(duì)擬AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響和可能機(jī)制,為中西醫(yī)結(jié)合治療AD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 器材與方法
1.1 動(dòng)物分組
SD大鼠80只,3~5月齡,體重(280±20) g,雄性、健康,由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心 [合格證號(hào):SCXK(黔)2002-0001]提供。所有大鼠隨機(jī)分為4組:①對(duì)照組;②擬AD模型組(模型組);③腎腧(雙)、大椎穴位埋線組(埋線組);④穴位埋線+胰島素組(聯(lián)合組)。每組20只。自然條件下飼養(yǎng),自由飲食。
1.2 試劑和儀器Okadaic acid(OA)(美國(guó)Sigma公司),臨用前溶解于10%二甲亞砜(DMSO)中,配制成濃度為0.4mmol/L的溶液;抗ChAT多克隆抗體(基因公司)。研究用生物顯微鏡(德國(guó)Leica); 日立-600型透射電鏡(日本日立);Morris水迷宮。
1.3 制作擬AD模型模型組、埋線組、聯(lián)合組大鼠用10%水合氯醛腹腔麻醉(30 mg/100 g)后,固定于大鼠腦立體定位儀上。參照大鼠腦立體定位圖譜,將自行設(shè)計(jì)的十字形套管插入海馬CA1區(qū)(前囟后3.6 mm,中線右旁開(kāi)2.4 mm,深度2.7 mm),通過(guò)套管將OA溶液0.5 μl注入海馬CA1區(qū)。5 min注射完畢,留針10 min。隔天注射1次,共5次;對(duì)照組用同樣方法注入等體積的對(duì)照液10% DMSO。術(shù)后創(chuàng)面滴加慶大霉素,肌注青霉素5 d預(yù)防感染。
1.4 胰島素側(cè)腦室注射聯(lián)合組大鼠于擬AD模型制作之時(shí)在左側(cè)顱骨鉆孔(前囟后1.3 mm,中線左側(cè)1.6 mm,深3.6 mm),注射生物合成人胰島素0.2 IU(40 IU/ml),5 min注射完畢,留針10 min。隔天1次,共注射5次。對(duì)照組、模型組大鼠用同樣的方法注射等體積的人工腦脊液。
1.5 腎腧、大椎穴位埋線埋線組大鼠于擬AD模型制作同時(shí),常規(guī)消毒后在雙側(cè)腎腧穴和大椎穴,用8號(hào)針頭埋入4/0號(hào)5 mm羊腸線,每7天1次。
1.6 大鼠行為學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)于海馬CA1區(qū)首次注射后的第4周開(kāi)始進(jìn)行。第1~6天進(jìn)行定向航行試驗(yàn),記錄60 s內(nèi)大鼠從入水中到爬上站臺(tái)所需時(shí)間即逃避潛伏期。第7天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn),記錄120 s內(nèi)大鼠在第Ⅲ象限的游泳時(shí)間和穿越站臺(tái)次數(shù)。
1.7 灌注取材水迷宮試驗(yàn)結(jié)束后,各組取5只大鼠的海馬CA1區(qū)組織。2.5%戊二醛和1%鋨酸固定, Epon812環(huán)氧樹(shù)脂包埋,醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙重染色,透射電鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)。各組剩余大鼠經(jīng)10 %水合氯醛麻醉后,生理鹽水和10%中性甲醛(4℃)灌注,斷頭取腦,置10%中性甲醛中浸泡固定。取海馬注射點(diǎn)前后約3 mm厚標(biāo)本,經(jīng)脫水、透明、浸蠟及石蠟包埋后行大鼠海馬冠狀位切片,片厚4 μm。
1.8 免疫組織化學(xué)兩步法切片脫蠟至水化, 3%H2O2孵育10 min以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。切片浸入0.01 mol·L-1TBS溶液(pH6.0)中,微波熱修復(fù)。滴加兔抗ChAT多克隆抗體, 37℃水浴箱孵育45 min。滴加通用型IgG抗體(Fab段)-HRP多聚體,37℃恒溫水浴箱孵育20 min ;使用DAB溶液顯色;蒸餾水沖洗,復(fù)染,脫水,封片。
1.9 顯微鏡觀察采用Leica攝像顯微鏡觀察并照像。計(jì)數(shù)每張切片4個(gè)隨機(jī)高倍視野中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)后取平均值作為計(jì)數(shù)結(jié)果,每組15張切片計(jì)數(shù)結(jié)果取平均值作為最后結(jié)果。
1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件包,數(shù)據(jù)先進(jìn)行單因素方差分析,多組之間差異兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)進(jìn)行分析,P
轉(zhuǎn)貼于
2 結(jié)果
2.1 大鼠行為學(xué)檢測(cè)各組大鼠在Morris水迷宮中定向航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從第1天開(kāi)始,模型組與對(duì)照組比較,平均逃避潛伏期均明顯延長(zhǎng)(P
2.2 透射電鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞對(duì)照組細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則,染色質(zhì)顆粒細(xì)小,均勻分布,細(xì)胞器豐富;模型組細(xì)胞核形態(tài)異常,核膜相對(duì)完整,呈皺縮狀態(tài),染色質(zhì)濃縮,分布不均,凝集成塊,邊集在核膜內(nèi)側(cè),細(xì)胞器破壞,整個(gè)細(xì)胞密度明顯增加,部分細(xì)胞核呈固縮狀態(tài);埋線組細(xì)胞核形態(tài)欠規(guī)則,染色質(zhì)輕度凝集和邊集;聯(lián)合組染色質(zhì)細(xì)小分散,細(xì)胞器較豐富,細(xì)胞形態(tài)接近對(duì)照組。
2.3 海馬CA1區(qū)ChAT的表達(dá)正常大鼠海馬CA1區(qū)錐體層有較多ChAT免疫陽(yáng)性神經(jīng)元分布,棕黃色的顆粒主要位于神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi);模型組與對(duì)照組相比,ChAT免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元明顯減少(P
3 討論
中醫(yī)認(rèn)為AD的發(fā)生與腎、腦有密切關(guān)系。腦髓的充養(yǎng),依靠腎的藏精,腎中精氣虧虛,腦髓得不到適當(dāng)?shù)难a(bǔ)充,則出現(xiàn)精神意識(shí)活動(dòng)障礙。治療應(yīng)以補(bǔ)腎益精為主,開(kāi)竅醒神為輔[5~7]。足太陽(yáng)膀胱經(jīng)下行聯(lián)絡(luò)于腎,上行進(jìn)入顱內(nèi)聯(lián)系于腦。“腎腧”穴屬膀胱經(jīng),刺激該穴可起到補(bǔ)腎益髓的作用。督脈上額交巔上,入絡(luò)腦。大椎為督脈要穴,又為諸陽(yáng)之會(huì),刺激本穴能振奮陽(yáng)氣,調(diào)節(jié)全身臟腑功能,從而起到健腦益髓的作用。穴位埋線是一種融多種療法、多種效應(yīng)于一體的復(fù)合性治療方法。羊腸線作為異體蛋白埋入穴位后,以線代針,對(duì)機(jī)體產(chǎn)生長(zhǎng)久的刺激,延長(zhǎng)針刺效應(yīng)時(shí)間,增加腧穴功能。
中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)廣泛存在胰島素和胰島素受體(IR), 胰島素在神經(jīng)系統(tǒng)中有著特殊的生物學(xué)效應(yīng)。它可以調(diào)節(jié)神經(jīng)元對(duì)葡萄糖利用,為神經(jīng)元活動(dòng)提供能量;同時(shí)胰島素還可促進(jìn)Ach合成,調(diào)節(jié)ChAT表達(dá);另外,胰島素還可抑制糖原合成激酶-3β(GSK-3β)的活性,減少Aβ產(chǎn)生。研究表明,胰島素及其受體通過(guò)激活特殊信號(hào)途徑參與調(diào)控學(xué)習(xí)和記憶,一方面可通過(guò)Grb-r/SOS,Ras/Raf,MEK/MAP激酶等細(xì)胞分子機(jī)制影響學(xué)習(xí)記憶的電生理基礎(chǔ)長(zhǎng)時(shí)程記憶的形成;另一方面可通過(guò)IRS-1、PI3-激酶、蛋白激酶C參與記憶過(guò)程[8]。
神經(jīng)元丟失是AD的主要病理特征,細(xì)胞凋亡在AD神經(jīng)元丟失中起重要作用。細(xì)胞凋亡(apoptosis)是細(xì)胞基因控制的一種主動(dòng)死亡過(guò)程。在培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物模型以及AD病人的尸解中,均發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡的證據(jù)[9,10]。本研究的形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示模型組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)染色質(zhì)凝集、邊集、核固縮等,都是細(xì)胞凋亡的典型表現(xiàn),說(shuō)明細(xì)胞凋亡參與了AD中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害的病理過(guò)程,進(jìn)而引起神經(jīng)細(xì)胞丟失,影響了模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。
中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)與學(xué)習(xí)記憶關(guān)系密切。該系統(tǒng)通過(guò)釋放乙酰膽堿(Ach)實(shí)現(xiàn)并維持學(xué)習(xí)記憶等功能。ChAT是催化Ach生物合成的限速酶,是反映大腦膽堿能系統(tǒng)功能的標(biāo)志酶。研究發(fā)現(xiàn),AD患者的認(rèn)知障礙與中樞膽堿能系統(tǒng)退變密切相關(guān)。AD早期即出現(xiàn)基底前腦的膽堿能細(xì)胞嚴(yán)重變性,ChAT及Ach含量減少 ,隨著病程的進(jìn)展,ChAT活性明顯下降,并且與癡呆的嚴(yán)重程度相關(guān)[11]。在本研究中,模型組海馬ChAT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量明顯減少,由此造成的Ach合成不足可能構(gòu)成了擬AD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力減退的神經(jīng)分子生物化學(xué)基礎(chǔ)。
穴位埋線和胰島素聯(lián)合應(yīng)用與單用穴位埋線比較,大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯提高,海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改善, ChAT表達(dá)增多。表明穴位埋線和胰島素聯(lián)合應(yīng)用比單用穴位埋線對(duì)擬AD大鼠的作用更明顯。推測(cè)其機(jī)理可能為埋線即時(shí)效應(yīng)明顯,只能在短時(shí)間內(nèi)調(diào)節(jié)體內(nèi)遞質(zhì)、激素、受體之間的活性作用,而胰島素作用持久,補(bǔ)充了由于多種原因?qū)е碌募?xì)胞受損而減少的活性物質(zhì), 埋線和胰島素作用側(cè)重各有不同,兩者結(jié)合,發(fā)揮了各自?xún)?yōu)勢(shì),彌補(bǔ)了相互不足,使埋線的效應(yīng)作用被加強(qiáng)或延長(zhǎng),從而改善了擬AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的能力。
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[摘 要] 目的:探討電針治療血管性癡呆(VD)的療效及可能機(jī)制。
方法:實(shí)驗(yàn)用4血管阻斷模型,用Morris水迷宮測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,并用電鏡觀察鼠腦海馬神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)變化。
結(jié)果:模型大鼠表現(xiàn)明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙,逃避潛伏期顯著延長(zhǎng);在原平臺(tái)象限跨越平臺(tái)次數(shù)未明顯高于其余3個(gè)象限;海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變,神經(jīng)元損害嚴(yán)重。電針及尼莫通組能顯著縮短定位航行試驗(yàn)的逃避潛伏期;在原平臺(tái)象限跨越平臺(tái)次數(shù)顯著多于其余3個(gè)象限,與假手術(shù)組比無(wú)顯著差異;海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化相對(duì)較輕,神經(jīng)元受損程度明顯輕于模型組。
[主題詞] 電針;海馬/超微結(jié)構(gòu);學(xué)習(xí)/針灸效應(yīng);記憶/針灸效應(yīng);腦缺血/針灸療法
EffectsofElectroacupunctureonLearningandMemoryAbilityandUltrastruct
uresofHippocampusNeuronsinRatsofWholeCerebralIschemiaWangLi,
LaiXinsheng,LeiWeiwei(GuangzhouUniversityofTCM,Guangdong5104
07,China)[Abstract] Purpose
Toobserveeffectsofelectroacupuncture(EA)
onlearningandmemoryabilityandneuronsofhip
pocampusintheratofvasculardementia(VD).Methods
Infourvesselsocclusion(4vo)modelrats,
Morriswatermazetestswereusedforbehaviouralstudy.
Ultrastructuralchangesofneuronsinhippocampuswereobservedwithtransmi
ssionelectronmicroscope.Results
Themodelanimalsneededmoreescapetime(latency)
thanthecontrolanimalsinplacenavigationtest,
andtheydidnotswimmoretimesinplatformquadrantthanintheothersinspatia
lprobetest.Theultra
structureofneuronsinhippocampuswerealteredobviouslyanddamagedsevere
ly.IntheEAgroupandNimotongroup,
thelatencieswerenotdifferentfromcontrolgroupratsinplacenavigationte
standinthespatialprobetest,
thetwogroupsratsswammoretimesinplatformquadrantthaninotherthreequad
rants.Comparedwiththemodelgroup,
thedamageoftheneuronsofhippocampusintheEAandNimotongroupswasobvious
lyslight.Conclusion
EAcanimprovelearningandmemoryabilityinVDmodelrats,
anditcanalsoimprovemarkedlyultrastracturalalterationofneuronsinbrai
n,inhibitingthedemageofneurons.
[Keywords] Electroacupuncture;Hippocampus/ultrastr;
Learning/acupeff;Memory/acupeff;CerebralIschemia/acupther
血管性癡呆(VascularDementia,VD)是指各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合征。學(xué)習(xí)記憶能力的下降,通常是癡呆的早期表現(xiàn)。目前較為普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為,主要是由于多梗塞后對(duì)某些中樞結(jié)構(gòu)的損害以及影響了中樞之間的聯(lián)系而導(dǎo)致癡呆。針灸療法對(duì)VD的智能及社會(huì)活動(dòng)能力康復(fù)有積極作用,能明顯提高患者的學(xué)習(xí)記憶能力,但有關(guān)機(jī)理方面的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究尚缺乏[1]。為探索針刺治療VD的療效和可能機(jī)制,我們采用4血管阻斷(4Vesselocclusion,4VO)全腦缺血法,建立近似人類(lèi)學(xué)習(xí)記憶障礙的大鼠模型,用水迷宮定量測(cè)量治療與非治療組之間學(xué)習(xí)記憶能力的差異,并觀察鼠腦海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的變化,為針灸臨床防治VD提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
1 材料
1.1 動(dòng)物及分組成年健康雄性SD大鼠50只,體重200~250g,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。模型制作存活大鼠按體重隨機(jī)分為假手術(shù)組、電針組、尼膜通組各10只,模型組11只。
1.2 儀器SDQ30雙極射頻電凝器(上海手術(shù)器械廠),Morris水迷宮,JEM1200EX電子顯微鏡(日本),D860電針儀(上海)。
1.3 藥品尼莫通,由德國(guó)拜耳公司提供,批號(hào):CAGFT3。
2 方法
2.1 模型制作方法模型組、電針組、尼膜通組動(dòng)物按4血管阻斷(4Vesselocclusion,4VO)方法制作模型。用10%水合氯醛(0.3ml/100g體重)腹腔麻醉大鼠,背側(cè)頸正中切口,暴露雙側(cè)第一頸椎橫突翼小孔,用直徑0.5mm電凝針插入雙側(cè)翼小孔燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈,造成永久性閉塞。24h后腹側(cè)頸正中切口,分離雙側(cè)椎動(dòng)脈,用微動(dòng)脈夾可逆性?shī)A閉頸總動(dòng)脈5min,共夾閉3次,每次間隔1h,常規(guī)飼養(yǎng)、觀察。假手術(shù)組手術(shù)程序同上,僅暴露4條血管,不發(fā)生腦缺血,常規(guī)飼養(yǎng)。
2.2 治療方法術(shù)后7天,刀口完全愈合,飲食正常,無(wú)肢體殘疾,開(kāi)始給予治療。
(1)電針組:用28號(hào)1寸毫針,于模型大鼠頭部“百會(huì)”穴斜刺0.5寸、“大椎”穴直刺0.5寸[2](取穴參照林文注等編著的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》),連接電針儀,施以連續(xù)波,頻率150Hz,強(qiáng)度以大鼠安靜耐受為度(約2.0mA),于每天電針1次,留針20min,連續(xù)治療10天。
(2)尼莫通組:大鼠給予尼莫通12mg/kg(將10片共300mg尼莫通先用少量的吐溫80混懸,再加蒸餾水至500ml,即為0.6mg/ml的尼莫通混懸液),按20ml/kg體重灌胃,每日1次,連續(xù)10天。
(3)假手術(shù)組和模型組未予任何治療。
2.3 檢測(cè)方法(1)Morris水迷宮[2]行為學(xué)檢測(cè)水迷宮由直徑130cm、高50cm水池組成,水深30cm,水溫26±1℃。在水池壁標(biāo)明4個(gè)入水點(diǎn),由此將水池等份為4個(gè)象限,任一象限正中放置一個(gè)直徑12cm、高29cm無(wú)色透明的平臺(tái),沒(méi)于水下1cm,水面覆蓋塑料泡沫,于術(shù)后第18天開(kāi)始水迷宮試驗(yàn)。程序包括①定位航行試驗(yàn)(placetest),歷時(shí)6天,每天上下午各4次,將大鼠從四個(gè)入水點(diǎn)面向池壁放入水中,記錄2min內(nèi)尋找平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期,escapelatency);②空間探索試驗(yàn)(spatialprobetest):定位航行試驗(yàn)結(jié)束后撤除平臺(tái),然后將鼠任選一入水點(diǎn)放入水中,測(cè)其2min內(nèi)跨原平臺(tái)及其余3個(gè)象限相應(yīng)平臺(tái)位置的次數(shù)和大鼠在水迷宮外環(huán)停留時(shí)間。
(2)海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)檢測(cè)隨機(jī)取各組大鼠5只,6%水合氯醛(0.3ml/100g體重)大鼠腹腔注射麻醉,暴露心臟,先以生理鹽水100ml經(jīng)主動(dòng)脈沖洗,繼灌注由4%多聚甲醛與1%戊二醛組成的磷酸緩沖液(PH值7.4)約200ml,再持續(xù)滴注40min,取腦,分離并留取海馬,常規(guī)電鏡制樣,Epon812包埋,超薄切片,透射電鏡觀察。
3 結(jié)果
3.1 行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果測(cè)試時(shí)大鼠飲食正常,體重恢復(fù)到原有水平,無(wú)肢體殘疾。
(1)定位航行試驗(yàn)4組大鼠在歷時(shí)6天訓(xùn)練中尋找平臺(tái)的平均潛伏期變化見(jiàn)表1。
表1 各組大鼠平均逃避潛伏期
從表1可以看到,假手術(shù)組、電針組、尼莫通組平均逃避潛伏期明顯短于模型組,這表明模型組大鼠學(xué)習(xí)獲取能力較差。將4組大鼠平均潛伏期進(jìn)行組間單因素方差分析,差異有非常顯著性意義(P<0.01),并作組間兩兩比較,結(jié)果顯示電針組大鼠平均潛伏期明顯短于模型組(P<0.01),而假手術(shù)組和尼莫通組與電針組之間的差異無(wú)顯著性意義(P>0.05),這表明電針能夠改善模型大鼠的學(xué)習(xí)鞏固和再現(xiàn)能力。
(2)空間探索試驗(yàn)撤除平臺(tái),四組大鼠2min內(nèi)跨越原平臺(tái)及其余3個(gè)象限相應(yīng)平臺(tái)位置次數(shù)。
假手術(shù)組大鼠在原平臺(tái)象限跨相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)為6.30次,其余右側(cè)、對(duì)側(cè)、左側(cè)3個(gè)象限跨相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)分別為0.90,1.10,2.30;電針組大鼠在原平臺(tái)象限跨相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)為5.40次,其余右側(cè)、對(duì)側(cè)、左側(cè)3個(gè)象限跨相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)分別為1.00,0.7,1.50;尼莫通組大鼠在原平臺(tái)象限跨相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)為5.30次,其余右側(cè)、對(duì)側(cè)、左側(cè)3個(gè)象限跨相應(yīng) 平臺(tái)次數(shù)分別為1.30,0.60,1.70,3組大鼠在原平臺(tái)象限跨相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)明顯多于其余3個(gè)象限(P<0.01)。模型組在原平臺(tái)象限跨越相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)為2.67次,另外3個(gè)象限分別為2.44,3.00,1.89,4個(gè)象限無(wú)顯著差異(P>0.05)。將4組大鼠在原平臺(tái)象限跨越相應(yīng)平臺(tái)次數(shù)作兩兩比較,電針組明顯多于模型組(P<0.01),與尼莫通組和假手術(shù)組相比,差異無(wú)顯著意義(P>0.05)。在水迷宮外環(huán)逗留時(shí)間假手術(shù)組平均為40.3秒,電針組為40.4秒,尼莫通組為47.5秒,模型組為75.8秒,模型組逗留時(shí)間比其它3組明顯延長(zhǎng)(P<0.05)。
3.2 海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化假手術(shù)組神經(jīng)元的細(xì)胞核(N)呈卵圓形,兩層膜()結(jié)構(gòu)清晰、光滑,核周間隙均勻,核內(nèi)染色質(zhì)(Ch)均勻分布;胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富,結(jié)構(gòu)完整,可見(jiàn)高爾基氏器(Go)分布,結(jié)構(gòu)呈扁平囊泡平行排列;線粒體(Mi)呈圓形、橢圓形,內(nèi)嵴清晰可見(jiàn),基質(zhì)均勻;粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(RER)集核周平行排列或散在分布;見(jiàn)少量脂褐素(Lic);大量糖原顆粒(Gl)存在于胞漿中。參見(jiàn)圖1。
模型組神經(jīng)元固縮或腫脹,細(xì)胞輪廓模糊,核膜()內(nèi)陷,鋸齒樣變,核周間隙擴(kuò)張或消失;染色質(zhì)(Ch)凝集成塊狀或溶解;核周?chē)?xì)胞器減少、崩解、消失,胞漿高爾基體(Go)腫脹呈泡狀;線粒體(Mi)腫脹、嵴斷裂,部分線粒體內(nèi)嵴溶解消失,透明成空泡;粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(RER)擴(kuò)張,表面核糖體脫落,出現(xiàn)大量脂褐素(Lic)沉積;局部有水腫空白區(qū)域()。參見(jiàn)圖2。
針刺組與尼莫通組神經(jīng)細(xì)胞組織異常改變明顯改善。針刺組核膜完整(),染色質(zhì)(Ch)均勻,胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富;僅偶見(jiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(RER)腫脹,有少量線粒體(Mi)空泡樣變化尚未恢復(fù)正常,脂褐素(Lic)較多。神經(jīng)元的損傷雖未完全恢復(fù)如假手術(shù)組,但較模型組明顯減輕,多數(shù)神經(jīng)細(xì)胞未見(jiàn)不可逆性損害。尼莫通組仍有部分核膜內(nèi)陷(),少量染色質(zhì)(Ch)凝集,核周部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(RER)及高爾基氏體(Go)腫脹,線粒體(Mi)雖未見(jiàn)空泡樣變化,嵴斷裂仍存在,可見(jiàn)針刺組對(duì)神經(jīng)元的改善作用優(yōu)于尼莫通組。參見(jiàn)圖3與圖4。
圖1假手術(shù)組×12K圖2模型組×12K圖3電針組×12K圖4尼莫通組×12K
4 討論
本實(shí)驗(yàn)采取被廣泛應(yīng)用的4血管阻斷法(4VO),引起全腦缺血,其中再灌注損傷和人類(lèi)因腦血管疾病引起學(xué)習(xí)記憶能力障礙有很大的相似性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,缺血再灌注損傷后,模型組動(dòng)物出現(xiàn)明顯記憶障礙。而電針組檢測(cè)其學(xué)習(xí)記憶行為結(jié)果顯示,能縮短模型大鼠逃避至平臺(tái)的潛伏期,并能增加在原平臺(tái)象限的跨越次數(shù),說(shuō)明電針能改善全腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶成績(jī)。通過(guò)電鏡下對(duì)海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的觀察,結(jié)果顯示,電針組比模型組神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)變化得到了明顯的改善,電針具有保護(hù)缺血大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞損害的趨勢(shì)。
百會(huì)和大椎均為督脈穴位,百會(huì)為“三陽(yáng)五會(huì)”,大椎為“諸陽(yáng)之會(huì)”,督脈與腦密切相關(guān),督脈通于腦,病變?cè)谀X,首取督脈。電針2穴,能疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)節(jié)平衡、醒腦開(kāi)竅、益智復(fù)聰。學(xué)習(xí)記憶屬于腦的高級(jí)神經(jīng)活動(dòng),而神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)功能活動(dòng)的基本單位。本實(shí)驗(yàn)表明針刺療法對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)具有特殊的調(diào)節(jié)作用,能拮抗神經(jīng)元的進(jìn)一步損害,電針明顯改善癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,與其對(duì)腦組織神經(jīng)元的保護(hù)作用密切相關(guān)。
尼莫通是目前為止發(fā)現(xiàn)的選擇性擴(kuò)張腦血管作用最強(qiáng)的鈣通道阻滯劑,進(jìn)入腦組織后能高度特異性地和海馬、皮質(zhì)的神經(jīng)元以及大腦內(nèi)參與學(xué)習(xí)和記憶區(qū)域的鈣通道受體結(jié)合,相互調(diào)節(jié)鈣離子流入神經(jīng)細(xì)胞,從而影響神經(jīng)元電學(xué)性質(zhì)及神經(jīng)介質(zhì)的平衡,選擇性抑制去極化時(shí)產(chǎn)生的鈣離子過(guò)量流入,同時(shí)擴(kuò)張腦血管,增加腦血液的供應(yīng),防止缺血狀態(tài)下對(duì)腦細(xì)胞帶來(lái)的損傷,使其保持正常的生理功能,是近年來(lái)常用于治療VD的西藥。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,電針和尼莫通對(duì)癡呆大鼠記憶障礙及神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)顯著改善作用,顯示出針刺治療VD的潛力,也向我們提示針刺對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用是否與調(diào)節(jié)腦缺血狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)鈣離子有關(guān)。因此,可以設(shè)想針刺對(duì)VD的治療可能是具有多系統(tǒng)、多水平、多層次、多靶點(diǎn)的特色,其有關(guān)機(jī)理需待進(jìn)一步深入研究。
5 參考文獻(xiàn)
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關(guān)鍵詞:學(xué)習(xí)記憶;突觸;海馬CA3區(qū);超微結(jié)構(gòu);跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)
中圖分類(lèi)號(hào):G804.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1007-3612(2012)03-0063-04
近年來(lái),有關(guān)運(yùn)動(dòng)與學(xué)習(xí)記憶關(guān)系的研究備受學(xué)界關(guān)注。長(zhǎng)期有規(guī)律的適宜運(yùn)動(dòng)可促進(jìn)大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力,研究表明,海馬CA3區(qū)是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵腦區(qū),其突觸結(jié)構(gòu)的可塑性變化與學(xué)習(xí)記憶能力關(guān)系密切。有關(guān)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)(long-term po-tentiation,LTP)的研究資料證實(shí):生活環(huán)境變化、行為訓(xùn)練、藥物等因素均可引起學(xué)習(xí)記憶相關(guān)腦區(qū)神經(jīng)元的突觸修飾或新突觸形成。在健身運(yùn)動(dòng)日益科學(xué)化的今天,如何科學(xué)益智地運(yùn)動(dòng),是人們十分關(guān)注的問(wèn)題。不同強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力到底有何影響?與學(xué)習(xí)記憶關(guān)鍵腦區(qū)有何關(guān)聯(lián)?這些問(wèn)題的相關(guān)性研究資料還很少。本文旨在通過(guò)不同強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng),探討其對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力及海馬區(qū)CA3神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)的影響,為揭示運(yùn)動(dòng)與腦科學(xué)中易化學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)機(jī)制研究積累有價(jià)值的資料。
1、材料和方法
1.1 動(dòng)物分組及喂養(yǎng)環(huán)境 雄性Wister成年大鼠(購(gòu)自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)40只,體重168~220g,被隨機(jī)分為四組:對(duì)照組(C,10只)、低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(LS,10只)、中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(MS,10只)、高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(HS,10只)。所有大鼠在塑料代謝籠(加不銹鋼網(wǎng)狀蓋)分籠喂養(yǎng),內(nèi)置消毒木屑。普通飼料喂養(yǎng),飲自來(lái)水。動(dòng)物室溫度在20~23℃,相對(duì)濕度在40~60%,自然光照,飼養(yǎng)室、用具每周用紫外燈消毒滅菌一次。
1.2 跑臺(tái)訓(xùn)練 C組大鼠不運(yùn)動(dòng),籠內(nèi)自由生活取食。運(yùn)動(dòng)組大鼠在跑臺(tái)(DSPT-202,中國(guó)杭州錢(qián)江科工貿(mào)公司制造)上熟悉運(yùn)動(dòng)3d后,LS組大鼠按15 m/min速度運(yùn)動(dòng),每日30 rain;MS組大鼠按25 m/min速度運(yùn)動(dòng),每日30 min;HS組大鼠以25 m/min速度開(kāi)始運(yùn)動(dòng),每日20 min,后每日以1 m/min增加跑臺(tái)速度,直至30 m/min終止。各組大鼠每6日休息一日,共計(jì)運(yùn)動(dòng)60 d。
1.3 回避反應(yīng)箱制作及STL測(cè)試 用木板自制回避反應(yīng)箱(80×20×45 cm),箱底裝有間隔1 cm的細(xì)鐵條,反應(yīng)箱被一有孔隔板分為兩半部,動(dòng)物可自由穿行,一側(cè)與電源相連,另一側(cè)不連接電源,為安全區(qū)。第60 d,先使所有大鼠熟悉一次性被動(dòng)回避反應(yīng)箱環(huán)境,后置于反應(yīng)箱內(nèi)自由穿行,當(dāng)?shù)竭_(dá)連接電源的一側(cè)時(shí),用50 v交流電連續(xù)刺激5 s。電擊后24 h,將每只大鼠置于安全區(qū),用秒表逐只記錄其步人潛伏期的時(shí)間(step-through latency,STL)。記錄所得數(shù)據(jù)并統(tǒng)計(jì)分析。
1.4 動(dòng)物取材及電鏡樣品制備 測(cè)定完全部動(dòng)物步入潛伏期的時(shí)間后,在深麻醉下(0.4%戊巴比妥鈉腹腔注射),用2%多聚甲醛和2.5%戊二醛磷酸緩沖液(pH7.4)經(jīng)左心室主動(dòng)脈灌注固定,即刻剝?nèi)≌X后置于上述固定液中浸泡3~4 h,再移入20%蔗糖磷酸緩沖液中4℃冰箱過(guò)夜。
每組任選5只大鼠整腦,參照鼠腦圖譜切取右側(cè)海馬CA3區(qū),切下1 mm3組織2塊,鋨酸固定、漂洗、常規(guī)脫水,Epon812包埋,先制成半薄切片,1%甲苯胺藍(lán)染色,光鏡定位后,再用LKM超薄切片機(jī)制成超薄切片,每塊切2片,經(jīng)枸櫞酸鉛及醋酸鈾染色,共計(jì)制成80張銅網(wǎng),用JEM-1230EX型透射電鏡在60K倍下觀察并用其CCD(數(shù)碼照相機(jī))拍照,每張銅網(wǎng)拍片兩張,共計(jì)拍片160張。
1.5 突觸界面結(jié)構(gòu)測(cè)量法 將每張60 K倍電鏡照片導(dǎo)入Mofic Images Advanced3.1軟件中,參照J(rèn)ones等方法,測(cè)量突觸界面曲率,即突觸界面弧長(zhǎng)(a)與弦長(zhǎng)(b)之比。平直型界面,弧長(zhǎng)等于弦長(zhǎng)、曲率為1(圖1)。
參照Culdner的方法,用Motic IITlflges Advanced3.1軟件測(cè)量突觸活性區(qū)長(zhǎng)度和突觸后膜致密物質(zhì)厚度(PSl3),突觸間隙寬度用多點(diǎn)平均法測(cè)量(圖2)。
2、結(jié)果
2.1 實(shí)驗(yàn)后大鼠STL測(cè)定
實(shí)驗(yàn)組大鼠運(yùn)動(dòng)60 d后,測(cè)定了實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中每只大鼠電擊后24 h的步人潛伏期的時(shí)間,其結(jié)果見(jiàn)表1。表1結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)各組均與對(duì)照組比較,LS組動(dòng)物的步人潛伏期時(shí)間有顯著性差異(P
2.2 電鏡觀察結(jié)果 電鏡下觀察,所見(jiàn)各組動(dòng)物海馬CA3區(qū)的GrayI型突觸,符合興奮性突觸的形態(tài)特征(圖3)。突觸界面活性區(qū)長(zhǎng)度、突觸后膜致密物質(zhì)厚度、突觸間隙寬度及曲率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。
從表2結(jié)果我們可以看出,與對(duì)照組相比,低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(LS)大鼠海馬CA3區(qū)突觸后膜致密物質(zhì)極顯著地增厚(圖4)。而中強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(MS,圖5)和高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(HS,圖6)沒(méi)有出現(xiàn)顯著變化。各運(yùn)動(dòng)組之間,所有參數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這提示低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)有較強(qiáng)的激發(fā)突觸活性區(qū)的作用,可能參與突觸部位神經(jīng)遞質(zhì)或其它相關(guān)功能物質(zhì)的合成或釋放過(guò)程。另外,60K倍電鏡下,海馬CA3區(qū)突觸界面呈現(xiàn)不同的類(lèi)型,具有平直型(突觸前膜與突觸后膜近似平行,圖7)和彎曲型兩種。彎曲型又有可分為兩種形式:突觸后膜向前膜一側(cè)彎曲的,為正向彎曲型;突觸前膜向突觸后膜一側(cè)彎曲的稱(chēng)負(fù)向彎曲型,各突觸界面彎曲類(lèi)型觀察統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。
由表3結(jié)果可見(jiàn):不同強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的突觸界面類(lèi)型,沒(méi)有明顯影響。
3、討論
本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用JEM-1230EX型透射電鏡在60K倍下觀察并用其OCD拍照,將每張照片導(dǎo)人MoticImages Advanced 3.1軟件中,用其工具測(cè)量了突觸間隙寬度、突觸后膜致密物質(zhì)厚度、活性區(qū)長(zhǎng)度、弧長(zhǎng)和弦長(zhǎng)、并由此計(jì)算了曲率。這種將學(xué)習(xí)記憶能力與海馬CA3區(qū)突觸結(jié)構(gòu)可塑性變化結(jié)合在Motic ImagesAdvanced 3.1軟件中,以數(shù)碼方式處理并呈現(xiàn),較以往手工測(cè)量有較大優(yōu)點(diǎn)。它可以減少測(cè)量誤差、節(jié)省測(cè)量時(shí)間,減少主觀因素影響,使結(jié)果更加客觀而可信。
Ader等(1972)曾報(bào)道,用一次性被動(dòng)回避反應(yīng)箱觀測(cè)大鼠在不同刺激強(qiáng)度、不同電擊時(shí)間等因素作用下的記憶保持能力,為后來(lái)一次性被動(dòng)回避反應(yīng)箱在學(xué)習(xí)記憶中的廣泛應(yīng)用開(kāi)創(chuàng)了先河。而后王光建(1987)實(shí)驗(yàn)了小鼠一次性被動(dòng)回避反應(yīng)參數(shù)的影響因素,章子貴(1995)應(yīng)用此模型測(cè)試了小鼠記憶保持能力與海馬CA3區(qū)突觸界面結(jié)構(gòu)的相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)所用的一次性被動(dòng)回避反應(yīng)箱以王光建實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為模版,將長(zhǎng)、寬、高適度放大自行改建而成,測(cè)設(shè)方法與章子貴實(shí)驗(yàn)較接近,但比其手段更先進(jìn)和科學(xué),故結(jié)果更加可靠、可信。
1949年Hebb在其專(zhuān)著中闡述的“突觸修飾”理論,是多半個(gè)世紀(jì)以來(lái)學(xué)者們研究學(xué)習(xí)記憶神經(jīng)機(jī)制的重要理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:低強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)成年大鼠電擊后24 h所測(cè)STL和海馬CA3區(qū)神經(jīng)元突觸后膜致密物質(zhì)厚度(PSI),圖8)有顯著影響,而中、高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)都沒(méi)有造成顯著影響。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn):海馬是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵腦區(qū),該區(qū)神經(jīng)元突觸后膜致密物質(zhì)增厚,是其興奮過(guò)程的重要表現(xiàn)形式,也是學(xué)習(xí)記憶能力鞏固與加強(qiáng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。據(jù)此可以認(rèn)為,不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)、學(xué)習(xí)記憶能力和海馬CA3區(qū)神經(jīng)元突觸界面結(jié)構(gòu)的可塑性變化三者之間存在著緊密的相關(guān)關(guān)系。
研究表明:運(yùn)動(dòng)能促進(jìn)人的認(rèn)知功能、個(gè)性和學(xué)習(xí)記憶能力發(fā)展。運(yùn)動(dòng)有助于動(dòng)物海馬等腦區(qū)神經(jīng)元增殖、存活和分化,并促進(jìn)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)效應(yīng),可提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的空間記憶和被動(dòng)逃避記憶能力。國(guó)內(nèi)張輝等的研究也發(fā)現(xiàn):使血管性癡呆大鼠進(jìn)行轉(zhuǎn)輪、平衡木、網(wǎng)屏等運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練,可提高它們的空間學(xué)習(xí)和記憶的能力,易化海馬LTP的形成。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。由此可以得出初步結(jié)論:低強(qiáng)度有氧運(yùn)動(dòng)可以有效促進(jìn)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力提高。
在突觸界面結(jié)構(gòu)上,PSD是最容易改變的參數(shù)。相關(guān)研究表明,PSD含有多種蛋白質(zhì)(微管蛋白、肌動(dòng)蛋白、神經(jīng)絲蛋白等)和酶,有諸多因素影響其變化。持續(xù)光照、連續(xù)補(bǔ)Zn、電刺激、腦室內(nèi)藥物注射等均可使相關(guān)腦區(qū)的PSD增厚或變薄,PSD增厚是突觸功能增強(qiáng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。我們據(jù)此認(rèn)為,這些蛋白質(zhì)分子構(gòu)型的改變,表現(xiàn)為致密物質(zhì)厚度的增加或減薄。低強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)提高大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的機(jī)制與海馬NMDA(N-甲基-D天門(mén)冬氨酸)受體亞單位NRI、NR2B以及BDNF(腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)基因表達(dá)的增加密切相關(guān)。谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的興奮性遞質(zhì),NMDA受體是非常重要的突觸后成分,其在海馬等腦區(qū)表達(dá)最高,它被激活可介導(dǎo)快速的興奮性突觸傳遞而形成突觸結(jié)構(gòu)和功能的可塑性。具體機(jī)制可能是:低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)首先引起外周胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-Ⅰ)水平增加,其透過(guò)血腦屏障使中樞IGF-Ⅰ也相應(yīng)增加,從而促進(jìn)c-fos和BDNF的表達(dá)。而B(niǎo)DNF能磷酸化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物海馬突觸后NM.DA受體的NRl和NR2單元,形成NRl一NR2復(fù)合體,使其處于激活狀態(tài)。NMDA受體不僅控制Na+、K+通道,而且還控制著Ca2+通道,當(dāng)NMDA受體被激活時(shí),可引起Ca2+通透性增加,使大量的Ca2+進(jìn)人胞內(nèi),導(dǎo)致胞內(nèi)游離[Ca2+]升高,進(jìn)而激活鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ(CAVIKⅡ),促使CaMKⅡ與NMDA受體亞基NR2B的細(xì)胞內(nèi)C末端結(jié)合,這種結(jié)合又可激活PKA及Ras/MAPK(絲裂原活化蛋白激酶)通路,進(jìn)一步發(fā)揮其第二信使的功能,激發(fā)LTP產(chǎn)生并引起一系列下游級(jí)聯(lián)反應(yīng)而合成相關(guān)蛋白質(zhì),從而造成突觸結(jié)構(gòu)和功能的可塑性,易化學(xué)習(xí)記憶能力。而中、高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)不能引起上述系列反應(yīng),表現(xiàn)為PSD無(wú)明顯變化與其學(xué)習(xí)記憶能力無(wú)顯著性差異相關(guān)聯(lián)。
關(guān)鍵詞:醫(yī)學(xué)影像學(xué);現(xiàn)狀;未來(lái);綜述
【中圖分類(lèi)號(hào)】R473【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-3783(2012)04-0140-01
隨著醫(yī)學(xué)影像學(xué)飛速發(fā)展,它在臨床醫(yī)學(xué)中的地位不斷提高,由X線、超聲、放射性核素顯像、CT、數(shù)字減影血管造成影及介入裝置、磁共振成像所組成的醫(yī)學(xué)影像學(xué)家族已經(jīng)成為臨床主要的診斷和鑒別診斷方法、醫(yī)院現(xiàn)在化的重要標(biāo)志、科學(xué)研究的主要手段及醫(yī)院重要的經(jīng)濟(jì)收入來(lái)源。現(xiàn)將醫(yī)學(xué)影像學(xué)的發(fā)展與展望綜述如下。
1 醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)發(fā)展的歷史回顧
1895年11月8日德國(guó)物理學(xué)家倫琴發(fā)現(xiàn)了一種新型射線(a kind of new rays)。并于11月22日為夫人拍攝了一張手部x線照片,也是人類(lèi)第一張x線影像。隨后,x線被廣泛的應(yīng)用于對(duì)疾病的診斷和治療,形成了放射診斷學(xué)和放射治療學(xué)。x線還用于疾病的預(yù)防、康復(fù)和預(yù)后隨訪。在醫(yī)學(xué)之外,還用于x線衍射分析和工業(yè)探傷等多種用途。因此,x線的發(fā)現(xiàn)對(duì)人類(lèi)作了重大貢獻(xiàn)。1971年亨氏菲爾德發(fā)明了CT,將傳統(tǒng)的X線的直接成像轉(zhuǎn)變?yōu)殚g接成像,從而奠定了現(xiàn)在影像學(xué)的基礎(chǔ),隨后出現(xiàn)的MRI、正電子發(fā)射型體層攝影術(shù)等影像學(xué)技術(shù),以及近期出現(xiàn)的分子成像和光成像,使醫(yī)學(xué)影像學(xué)在顯示形態(tài)學(xué)狀態(tài)之外,還能完成組織器官功能檢查,并最終在分子和細(xì)胞水平顯示組織、器官的化學(xué)成分和代謝變化。
2 醫(yī)學(xué)影像學(xué)現(xiàn)狀
曾經(jīng)在我國(guó)長(zhǎng)期使用用的x線透視檢查的應(yīng)用逐年減少, 大型醫(yī)院或者發(fā)達(dá)地區(qū)的中小醫(yī)院已逐步取消透視, 而代之 以x線攝影檢查, 且以DR檢查占主導(dǎo)地位。傳統(tǒng) X線造影檢查被多排螺旋CT和磁共振成像所取代 首先是 X線脊髓造影檢查被 MRI所取代;其次是多排螺旋CT和MRI結(jié)合光學(xué)內(nèi)鏡逐步取代 X線消化道造影、經(jīng)靜脈腎盂造影和膽道造影等檢查;然后是 DSA的診斷性血管造影檢查逐步被CT血管成像和MR血管成像所取代。 伴隨設(shè)備的逐步普及,CT已經(jīng)成為臨床(尤其急診)最重要的影像檢查方法。MRI具有無(wú)創(chuàng)傷、 無(wú)射線輻射危 害,成像參數(shù)多、獲得的信息量大,軟組織對(duì)比度最佳等顯著優(yōu)點(diǎn),是最活躍的影像學(xué)研究手段,已經(jīng)成為很多重要疾病的確證診斷方法。超聲以其設(shè)備普及、價(jià)格低廉、無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)射線輻射危害、可在病床旁邊實(shí)施和便于復(fù)查等優(yōu)點(diǎn), 成為目前臨床應(yīng)用最主要的影像學(xué)篩選檢查技術(shù)。以早年的CT為起點(diǎn),CT、MRI等設(shè)備開(kāi)始提供橫斷層面影像。同時(shí),得益于計(jì)算機(jī)技術(shù)的進(jìn)步,今天已經(jīng)可以在較短時(shí)間內(nèi)把上述的信息“重組”(reformation)為三維的、分別顯示興趣結(jié)構(gòu)的、帶有仿真色彩的,甚至以?xún)?nèi)窺鏡的信息模式顯示的“直觀信息”。舉例說(shuō),一個(gè)重度創(chuàng)傷的病人可能會(huì)有骨折、顱腦損傷、內(nèi)臟損傷、血管損傷及其他并發(fā)癥。今天,只需用CT從頭到腳在數(shù)十秒鐘內(nèi)完成采集,病人即可回病房作急癥處理,而放射科醫(yī)師可使用一次采集的信息分別顯示出骨骼、顱腦、內(nèi)臟、血管等結(jié)構(gòu)與病變,并給急癥醫(yī)師提供“直觀的”興趣結(jié)構(gòu)的三維的、彩色仿真的診斷信息。這樣的信息已經(jīng)超越了大體解剖學(xué)的可視能力,達(dá)到了即使在手術(shù)刀或解剖刀下都不可能完全洞察的水平。
3 醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)
各種醫(yī)學(xué)影像學(xué)設(shè)備向小 型化、專(zhuān)門(mén)化、高分辨力和超快速化方向發(fā)展,MRI和CT的全器官灌注成像得到臨床普及應(yīng)用。雖然目前MSCT主要生產(chǎn)廠家的設(shè)計(jì)理念和主攻方向不一致,導(dǎo)致彼此設(shè)備的差異巨大,但是可以預(yù)測(cè),在不遠(yuǎn)的將來(lái),CT機(jī)的構(gòu)造(包括發(fā)生器、X線球管的結(jié)構(gòu)和數(shù)量、探測(cè)器種類(lèi)和排數(shù)等) 將發(fā)生實(shí)質(zhì)性變改, 也許球管和探測(cè)器的旋轉(zhuǎn)速度更快,使MSCT的時(shí)間分辨力突破50 ms大關(guān),使心臟得到真正的“凍結(jié)”,而探測(cè)器材質(zhì)的改進(jìn)能顯著提高M(jìn)SCT的空間分辨力。 各種介入治療成為常規(guī)有效的治療方法。集診斷與治療一體化的醫(yī)學(xué)影像學(xué)設(shè)備也在不斷成熟和普及, 使疾病的診斷更加及時(shí)、 準(zhǔn)確,治療效果更佳。應(yīng)用計(jì)算機(jī)仿真技術(shù)設(shè)計(jì)外科手術(shù)方案、 由影像導(dǎo)航 系統(tǒng)直接引導(dǎo)外科手術(shù)入路、確定手術(shù)切除范圍,并在術(shù)中直接應(yīng)用MRI對(duì)病灶切除范圍進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)會(huì)逐漸普及應(yīng)用。在影像學(xué)網(wǎng)絡(luò)化的基礎(chǔ)上,醫(yī)學(xué)圖像處理將成為常規(guī),而服務(wù)器軟件取代工作站,實(shí)現(xiàn)多點(diǎn)同時(shí)后處理,并使圖像后處理的自動(dòng)化程度進(jìn)一步提高。 伴隨遠(yuǎn)程影像學(xué)的普及和寬頻帶網(wǎng)絡(luò)的應(yīng)用,醫(yī)學(xué)影像學(xué)圖像的遠(yuǎn)程傳輸更為快捷,圖像更加清楚,影像學(xué)科醫(yī)生可以在家里或者在出差旅途中完成診斷報(bào)告。
分子成像是醫(yī)學(xué)影像學(xué)的熱點(diǎn)研究方向之一,伴隨分子成像的研究進(jìn)展,會(huì)有多種組織、器官特異性對(duì)比劑問(wèn)世,這些新型對(duì)比劑能顯示特定基因表達(dá)、 特定代謝過(guò)程、特殊生理功能,其毒副作用更小、對(duì)比增強(qiáng)效果更佳、診斷的特異性更強(qiáng),真正實(shí)現(xiàn)疾病早期診斷。開(kāi)發(fā)療效監(jiān)測(cè)對(duì)比劑(或稱(chēng)分子探針),以在最短時(shí)間得到治療的反饋信息, 在分子水平上進(jìn)行疾病的靶向治療。除PET外, 其他醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)也能直接用于藥物的研發(fā)和監(jiān)測(cè)療效,在活體早期、連續(xù)觀察藥物或基因治療 的機(jī)制和效果,以利于藥物篩選和新藥開(kāi)發(fā)。此外,分子成像方法和圖像后處理技術(shù)將得到持續(xù)改進(jìn),并開(kāi)發(fā)出用于分子成像的影像學(xué)新技術(shù)。 醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)的進(jìn)展還將導(dǎo)致影像學(xué)科內(nèi)部人員構(gòu)成發(fā)生變化,物理師、數(shù)學(xué)家、生物醫(yī)學(xué)工程師、計(jì)算機(jī)專(zhuān)家和循證醫(yī)學(xué)專(zhuān)家占影像科室人員的比例越來(lái)越高,針對(duì)某種重大疾病可以組建包含內(nèi)、外科和影像學(xué)醫(yī)生的新型科室。醫(yī)學(xué)影像學(xué)檢查不僅在診斷與治療的環(huán)節(jié)發(fā)揮作用,而且可以在疾病預(yù)防、健康體檢、重大疾病篩查、健康管理、早期診斷、病情嚴(yán)重程度評(píng)估、治療方法選擇、療效評(píng)價(jià)、康復(fù)等環(huán)節(jié)發(fā)揮越來(lái)越大的作用,醫(yī)學(xué)影像學(xué)科的地位必將不斷提高。參考文獻(xiàn)
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